悬浮细胞是指在培养过程中不需要依赖支持物表面，能够在培养基中以悬浮状态生长的一类细胞。这类细胞包括淋巴细胞、血液系统来源的细胞（如小鼠白血病细胞WEHI-3, 人白血病细胞K-562, HL-60）以及在工业中应用广泛的传代细胞，例如SP2/0、NS0、CHO、BHK和HEK293细胞等，它们主要用于重组蛋白质的生产。此外，兽用生物制品中常用的悬浮细胞有BHK21、MDCK细胞，以及通过微载体悬浮培养的Vero、PK、ST和Marc145细胞。

   悬浮细胞的培养相较于贴壁细胞更为简单，因为不需要胰酶消化进行传代。然而，对新手来说，悬浮细胞的培养可能更具挑战性，因为它们容易出现死细胞和细胞分化的问题。

培养悬浮细胞时，需要特别注意以下几点：

1. 耐心等待复苏：悬浮细胞从冻存状态复苏后可能需要7-10天（如THP-1细胞）或5-7天（如Jurkat细胞）才能恢复到正常增殖状态。

2. 接种密度：接种时密度不应低于50万个/ML，以避免不增殖的问题。但有些细胞在高密度下状态会变差，需根据具体细胞类型调整。

3. 培养条件：保持适当的温度和CO2浓度，必要时通过水平面打十字震动来维持细胞悬浮状态。

4. 换液技巧：定期更换培养基，避免培养基颜色变黄或细胞密度过高。换液时要小心操作，避免扰动细胞沉淀。

5. 传代培养：直接分瓶，无需胰酶消化。把握传代时机，通常在80%~90%汇合阶段进行，过早或过晚都会影响细胞健康。

6. 转染问题：悬浮细胞不易转染，主要是因为脂质体转染的效率低于贴壁细胞。可以考虑使用非脂质体转染试剂或电转染方法来提高转染效率。

7. 大规模培养：在大规模培养中，需要注意培养基的循环导入空气、搅拌速度、定期检测细胞生长状况，以及控制血清浓度等。

8. 去除死细胞：可以采用磁珠标记、流式分选、沉降法、低速离心法或活细胞短暂贴壁法来去除悬浮细胞中的死细胞。

9. 观察生长状态：通过显微镜观察细胞形态、培养基颜色变化来判断细胞生长状态，必要时进行传代或调整培养条件。

10. 预防污染：严格执行无菌操作，定期检查培养基是否有细菌、真菌、支原体等污染，并采取相应处理措施。

悬浮细胞的培养需要细致的操作和对细胞特性的深入了解，但通过上述要点的注意，可以有效提高悬浮细胞培养的成功率。