贴壁细胞，也称为粘附细胞，是一种需要附着在支持物表面才能生长和分裂的细胞类型。这类细胞通常具有特定的形态，如成纤维细胞样或上皮细胞样，并且在显微镜下观察时，细胞会铺展并形成梭形、不规则三角形或扇形等形态。贴壁细胞的培养过程包括多个关键步骤：

一、实验步骤

1、试剂准备：配制DMEM完全培养基，预热至37℃。

2、细胞复苏：

1) 从-80℃或液氮中取出冻存细胞，迅速在37℃水浴中化冻。

2) 将化冻后的细胞液与DMEM完全培养基混合，离心后重悬并转移至培养皿。

3、细胞传代：

1) 弃去旧培养基，用PBS清洗细胞。

2) 使用Trypsin消化细胞，然后加入完全培养基终止消化。

3) 重悬细胞并根据需要进行传代。

二、常见问题及解决方法：

1、细胞不贴壁：

原因：胰蛋白酶消化过度、支原体污染、pH值不当、细胞老化或接种浓度不合适。

解决方法：调整消化时间、检测并处理支原体污染、调整pH值、使用新细胞或调节接种密度。

2、传代后部分细胞漂浮：

原因：传代密度过高、细胞状态不佳、机械损伤、培养基不适应。

解决方法：调整传代密度、改善细胞状态、轻柔操作、适应新培养基。

三、细胞培养注意事项：

1. 细胞培养过程中，应定期观察细胞状态，及时更换培养基。

2. 传代时，细胞密度应控制在适当范围内，避免过密导致的细胞漂浮和死亡。

3. 保持无菌操作，避免污染，如定期消毒超净台和使用酒精喷洒耗材。

4. 细胞消化时，应轻柔操作，避免产生气泡，减少对细胞的损伤。