收到细胞后,应根据细胞的类型(如冻存细胞、活细胞、贴壁细胞或悬浮细胞)和运输方式(常温或干冰运送)采取相应的处理步骤。
确认细胞状态的步骤如下:
1. 检查包装和外观:
1) 检查细胞包装是否完好,没有破损。
2) 观察细胞培养瓶的外观,确保没有泄露或污染迹象。
2. 初步静置:
将细胞放置在37℃培养箱中静置24小时,让细胞适应新环境。
3. 显微镜观察:
1) 使用显微镜检查细胞的生长密度和形态。
2) 悬浮细胞:活细胞应透亮有光泽,死细胞暗淡无光且膜碎裂。
3) 贴壁细胞:活细胞应贴壁且膜完整,死细胞不能贴壁。
4) 注意细胞的贴壁情况、形态和密度,避免因运输导致的细胞脱落或状态变化。
4. 台盼蓝染色法:
1) 将细胞用台盼蓝染色,活细胞不着色,死细胞会被染成蓝色。
2) 染色时间不宜过长,通常在3分钟内观察。
5. 细胞活率检测:
1) 计数台盼蓝染色后的活细胞和死细胞比例,评估细胞活率。
2) 通常认为细胞膜完整性丧失即为细胞死亡。
6. 记录和拍照:
1) 对细胞状态进行拍照记录,以便于后续的观察和比较。
2) 拍照时包括细胞的详细状态,以及培养瓶的外观。
7. 调整培养条件:
1) 根据细胞状态调整培养基的血清含量,以促进细胞恢复。
2) 对于新收到的细胞,可能需要在前几代增加血清浓度。
8. 传代处理:
1) 如果细胞密度在60%以下,收集细胞后重新铺瓶至6mL完全培养基。
2) 若细胞密度达70%80%以上,进行传代,建议初传时采用1:2比例,逐步调整传代比例。
9. 定期监测:
1) 定期观察细胞状态,记录生长曲线和形态变化。
2) 注意细胞的生长速度、形态和密度,确保细胞健康生长。
通过上述步骤,可以有效确认并维持细胞的健康状态,确保后续实验的顺利进行。