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发布日期:2025/7/10 17:00:00

收到细胞后,应根据细胞的类型(如冻存细胞、活细胞、贴壁细胞或悬浮细胞)和运输方式(常温或干冰运送)采取相应的处理步骤。

确认细胞状态的步骤如下:

1. 检查包装和外观:

1) 检查细胞包装是否完好,没有破损。

2) 观察细胞培养瓶的外观,确保没有泄露或污染迹象。

2. 初步静置:

    将细胞放置在37℃培养箱中静置24小时,让细胞适应新环境。

3. 显微镜观察:

1) 使用显微镜检查细胞的生长密度和形态。

2) 悬浮细胞:活细胞应透亮有光泽,死细胞暗淡无光且膜碎裂。

3) 贴壁细胞:活细胞应贴壁且膜完整,死细胞不能贴壁。

4) 注意细胞的贴壁情况、形态和密度,避免因运输导致的细胞脱落或状态变化。

4. 台盼蓝染色法:

1) 将细胞用台盼蓝染色,活细胞不着色,死细胞会被染成蓝色。

2) 染色时间不宜过长,通常在3分钟内观察。

5. 细胞活率检测:

1) 计数台盼蓝染色后的活细胞和死细胞比例,评估细胞活率。

2) 通常认为细胞膜完整性丧失即为细胞死亡。

6. 记录和拍照:

1) 对细胞状态进行拍照记录,以便于后续的观察和比较。

2) 拍照时包括细胞的详细状态,以及培养瓶的外观。

7. 调整培养条件:

1) 根据细胞状态调整培养基的血清含量,以促进细胞恢复。

2) 对于新收到的细胞,可能需要在前几代增加血清浓度。

8. 传代处理:

1) 如果细胞密度在60%以下,收集细胞后重新铺瓶至6mL完全培养基。

2) 若细胞密度达70%80%以上,进行传代,建议初传时采用1:2比例,逐步调整传代比例。

9. 定期监测:

1) 定期观察细胞状态,记录生长曲线和形态变化。

2) 注意细胞的生长速度、形态和密度,确保细胞健康生长。

通过上述步骤,可以有效确认并维持细胞的健康状态,确保后续实验的顺利进行。

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