细胞培养中，细胞间交叉污染并不罕见，多是由于在培养中操作时各种细胞同时进行，混杂使用器皿和液体所致，这种污染能使细胞的生长特性、形态特征等发生变化，有些变化较轻、不易察觉，有些可能由于污染的细胞具有生长优势最终压过原来细胞而导致细胞的生长抑制，最终死亡。常用观察细胞形态学、分析生长特性和核型、检测细胞的标记物等方法检测交叉污染的细胞。

一、操作技巧：

1、操作时，试剂不用尽量及时盖上盖子，每开一个试剂要用酒精灯消毒。

2、从培养箱取放细胞前，用酒精清洁双手，尽量缩短开门时间和减少开门次数。

3、培养瓶放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。

4、使用移液枪时，将容器倾斜以便于移液，切勿将枪杆碰触瓶口及内壁。一旦发生倒吸情况，要及时用酒精棉球擦拭，以免液体残留导致细菌滋生。

5、先取试剂、耗材，再取移液枪、装枪头。很多人习惯先an装枪头，然后去拿试剂、耗材，殊不知无意间枪头已经触碰其他地方导致污染。

6、冻存细胞时冻存管盖子需拧紧，复苏细胞时，从液氮罐取出冻存管，轻拧盖子，以确认盖子是否拧紧。镊子夹住冻存管盖子与管体交界处，在37度水浴锅中快速解冻，水面不可超过冻存管盖沿，不建议直接扔进水中，以免水渗入造成污染。

二、污染预防方法：

防止污染，预防是关键，预防措施应该贯穿整个细胞培养的始终。

1、器皿准备中的预防:用于细胞培养的器皿应该严格消毒，做到真正洁净;应该无菌的物品，要做到消毒严格、真正无菌;器皿的运输、贮存过程中，要严格操作，谨防污染。

2、开始操作前的预防:应当按厂家规定，定期清洗或更换超净台的空气滤网，请专职人员定期检查超净台的空气净化标准;检查培养皿是否有消毒标志，有条件得实验室可以使用一次性用品;检查新配置的培养液，确认无菌方可使用;操作前提前半小时启动超净台的紫外灯消毒;操作应戴口罩，消毒双手。

3、操作过程中的预防:主要包括:超净台内放置的所有培养瓶瓶口不能与风向相逆，不允许用手触及器皿的无菌部分，如瓶口和瓶塞内侧;在安装吸管冒、开启或封闭瓶口操作时要经过酒精灯烧灼，并在火焰附件工作;吸取培养液、细胞悬液等液体时，应专管专用，防止污染扩大或造成培养物的交叉污染;使用培养液前，不宜较早开启瓶口;开瓶后的培养瓶应保持斜位，避免直立;不再使用的培养液应立即封口;培养的细胞在处理之前不要过早的暴露空气中;操作时不要交谈、咳嗽，以防唾沫和呼出气流引发污染;操作完毕后应将工作台面整理好，并消毒擦拭工作面，关闭超净台。

4、其他预防:及早冻存培养物;重要的细胞株传代工作应有两个人独立进行;购入的未灭活血清应采取56度水浴灭活30分钟使血清的补体和支原体灭活;为了避免诱导抗药细菌，应定期更换培养系统的抗生素，或尽可能不用抗生素;对新购入的细胞株应加强观察，防止外来的污染源;定期消毒培养箱。