酵母双杂交（Yeast Two-Hybrid, Y2H）是一种研究细胞内蛋白质之间相互作用的经典分子生物学技术。最早是1989年由Fields等在研究真核生物基因转录调控中提出并初步建立的。随着分子生物学的发展，在酵母双杂交的基础上又建立了酵母单杂交、膜体系酵母双杂交、酵母三杂交等多项技术，用于蛋白-蛋白、蛋白-DNA/RNA/配体之间相互作用的研究，在功能基因组学和互作组学研究中发挥重要作用。