贴壁细胞铺板是细胞实验中的基础且关键步骤,它的目的是把贴壁生长的细胞按照一定数量和密度均匀地接种到新的培养容器里,比如培养皿、培养瓶或细胞培养板。正确的铺板操作能够保证细胞的生长状态良好,实验结果的准确性和可重复性。
细胞实验过程中贴壁细胞铺板操作实用技巧如下:
1、无菌操作
整个操作过程必须在超净工作台内进行,严格遵守无菌操作原则,避免细胞污染。一旦细胞被污染,不仅会影响实验结果,还可能导致细胞死亡。
2、消化时间控制
消化细胞时,胰蛋白酶 EDTA 溶液的浓度和消化时间要根据细胞的种类和生长状态进行适当调整。消化时间过短,细胞可能无法完全脱落;消化时间过长,会对细胞造成损伤,影响细胞的活性和生长状态。
3、细胞计数和稀释准确性
在细胞计数和稀释过程中,要确保操作的准确性。细胞计数时,要多次计数取平均值,以减少误差。稀释细胞悬液时,要充分混匀,避免细胞沉淀。
4、避免剧烈晃动
铺板后,细胞需要一定的时间来贴壁。在细胞贴壁前,尽量避免剧烈晃动培养容器,以免影响细胞的贴壁过程。一般在细胞贴壁后(通常为2-4小时),可以轻轻晃动培养容器,使培养基中的营养物质均匀分布。
5、定期观察细胞生长状态
定期观察细胞的生长状态,包括细胞的形态、密度和生长情况等。如果发现细胞生长异常,如细胞形态不规则、出现空泡或细胞死亡等现象,应及时分析原因并采取相应的措施。