细胞培养技术是指在体外条件下培养活细胞的过程,它在生物医学研究、药物开发、疫苗生产以及基因工程等领域中具有重要应用。细胞培养的基本原理是模拟体内环境,为细胞提供适宜的营养、气体环境和物理条件,使细胞能够生长和繁殖。
细胞培养的关键要素:
1. 无菌环境:超净工作台和生物安全柜是维持无菌环境的重要工具。
2. 培养基:含有细胞所需的营养成分,如氨基酸、维生素、无机盐等,以及生长因子和血清。
3. 气体环境:通常需要5% CO2来维持细胞培养液的pH值在7.2-7.4之间。
4. 温度和湿度:37°C是哺乳动物细胞培养的标准温度,相对湿度应维持在90%以上。
细胞培养的基本步骤:
1. 准备阶段:包括无菌操作、培养基和血清的准备、培养容器的消毒等。
2. 细胞获取与培养:可以通过原代培养(从组织中分离细胞)或使用已建立的细胞系。
3. 细胞培养:将细胞接种到培养皿或瓶中,加入培养基,维持在适宜的温度、pH值和二氧化碳浓度下。
4. 细胞传代:当细胞达到一定密度时,需要通过消化和重新接种来扩大细胞数量。
5. 细胞冻存:为了长期保存细胞,通常会将细胞以一定的比例混合冷冻保护剂后进行液氮保存。