原代细胞是指直接从人或动物组织中分离出来的细胞，它们在体外培养时保持了与体内细胞相似的生物特性和功能。严格来说，从机体分离出来到首次传代之前的细胞称为原代细胞。这些细胞在研究中被广泛使用，因为它们更接近于体内的生物学环境，适用于药物筛选、毒理研究和癌症研究等领域。

提高原代细胞纯度的方法主要包括以下几种：

一、机械分离法

1、‌原理‌：通过物理切割或刮除目标细胞区域。‌

2、‌操作要点‌：

显微镜下标记杂细胞分布区域，用刮刀精准剔除。‌

适用于成纤维细胞与上皮细胞交错分布的场景。‌

3、‌优缺点‌：

优点：操作简单、成本低。‌

缺点：机械损伤大，纯度可能低于酶消化法。

二、酶消化法：

1、原理：使用胰蛋白酶、胶原酶等酶类消化组织。

2、应用：广泛用于贴壁细胞，如成纤维细胞、上皮细胞。

3、操作：将组织剪碎后，加入适量酶液消化，控制消化时间和温度，避免过度消化。

4、‌优缺点‌：

优点：分离效率高，细胞活性好。

缺点：酶成本高，消化时间难以控制，可能对某些细胞类型有毒性。‌

三、磁珠分离法

利用特异性单克隆抗体磁珠靶向结合内皮细胞表面标志物，纯度高但细胞得率较低，适合炎症研究等对纯度要求严格的场景。

四、悬浮离心法：

1、应用：适用于血液、羊水、胸水或腹水中的悬液材料。

2、操作：低速离心分离，避免细胞损伤。

五、高速离心沉淀法：

利用重力离心，不同种类的细胞会聚集到一个层面。

应用：提取血液细胞时常用。

六、密度梯度离心：

这是一种常用的分离和筛选肝细胞的方法。通过使用密度梯度介质（如Percoll或Ficoll），可以将目标细胞与其他细胞分离出来，从而提高目标细胞的纯度。

七、综合建议

1、‌组织预处理‌：运输时使用含BSA和双抗的DMEM/F12培养基，4℃保存‌。

2、‌酶组合方案‌：胶原酶+胰蛋白酶分步消化，配合40μm滤网过滤。

3、‌纯度验证‌：建议结合克隆法和标志物检测（如流式细胞术）。

这些方法各有优缺点，适用于不同的实验需求和研究目的。在实际操作中，可以根据具体情况选择合适的方法，以提高原代细胞的纯度和存活率。