流式细胞术检测细胞周期是一种通过荧光染料（如碘化丙啶，PI）结合DNA，根据DNA含量区分细胞周期阶段的方法。该方法广泛用于生物学研究中，尤其是分析细胞增殖和凋亡状态。流式细胞术检测细胞周期的具体步骤如下：

一、‌细胞培养与收集‌

取对数生长期的细胞，用胰酶消化后离心收集，PBS洗涤去除残留培养基。

细胞固定‌

用预冷的70%-75%乙醇重悬细胞，4℃固定至少30分钟（或过夜），使细胞膜通透化。‌

二、‌洗涤与染色‌

离心弃乙醇，PBS洗涤2次去除残留固定液。

加入RNA酶（室温孵育30分钟）消化RNA，避免干扰DNA检测。

加入碘化丙啶（PI）染液避光孵育30分钟，PI与DNA结合后通过荧光强度反映DNA含量。

三、‌上机检测‌

用流式细胞仪在488nm激发波长下检测红色荧光，计数至少2×10⁴个细胞以保证数据准确性。

四、关键注意事项:

1、PI为致癌物，需避光操作并戴手套。

2、固定后避免过度吹打，防止细胞碎片产生。

3、上机前用滤网过滤细胞悬液，避免细胞团块堵塞仪器。

流式细胞术检测细胞周期的关键在于细胞固定和染色环节，确保细胞均匀分散且染色充分，才能获得准确的周期分布数据。实验过程中需注意避光操作，以防止荧光信号衰减。