流式细胞术实验过程中可能会遇到多种问题，以下是一些常见问题及其解决方案的总结：

‌一、无信号/荧光强度弱‌

‌可能原因‌：补偿设置不正确、仪器增益过低、抗体失效或匹配错误。

‌解决方案‌：检查单色阳性对照和补偿设置，确保抗体未过期且种属匹配，适当提高增益。

‌二、荧光强度过高‌

‌可能原因‌：抗体浓度过高、非特异性结合。

‌解决方案‌：进行抗体滴定实验，优化使用浓度，并加入FC受体封闭剂减少非特异性结合。

‌三、样本处理问题‌

‌细胞固定不当‌：不可直接将70-75%乙醇加入细胞悬液，应缓慢滴入无水乙醇至终浓度，避免细胞团簇‌。

‌细胞丢失‌：使用尖底离心管，离心后吸上清时残留1mm水膜，避免吸头接触液面或吹打‌。

‌碎片过多‌：操作轻柔，避免过度消化或吹打，离心转速和时间需适当‌。

‌四、多色实验颜色重叠‌

‌解决方案‌：选择光谱重叠小的荧光染料，正确设置补偿对照，确保单染样品与实验样品亮度一致。

‌五、结果分析困难‌

‌G1期细胞群定位‌：设置直方图为对数模式，调整放大倍数，二倍体峰出现在横坐标12倍体峰×3的位置‌。

‌碎片干扰‌：通过门控排除碎片，或优化样本制备减少碎片产生‌。

‌六、对照设计不合理‌

‌关键对照‌：需设置空白对照、同型对照和单阳性补偿对照，避免假阳性/阴性结果。

核心注意事项‌：

操作规范‌：保持细胞活力，减少处理时间和机械损伤‌。

仪器设置‌：PI染色时选择线性坐标，加入RNase消除RNA干扰‌。

实验顺序‌：PI染色实验应放在最后，或彻底清洗仪器后再进行其他实验‌。