猪细胞系是指从猪的组织中分离并经过初次传代成功后，能够持续培养并进行多次传代的细胞群体。这些细胞系可以用于研究猪的生物学特性、疾病模型、药物筛选以及异种移植等领域。
一、原代细胞分离
1、组织处理：取临床无菌的猪脂肪组织或肾脏，用含双抗（青霉素100U/ml+链霉素100U/ml）的PBS充分洗涤，剪除血管和筋膜后剪成1mm³碎块。
2、酶消化：加入混合胶原酶（或0.25%胰蛋白酶），37℃振荡消化30-40分钟至组织呈乳糜状，加等体积完全培养基（如DMEM+10%FBS）终止消化。
3、过滤离心：通过200目细胞滤网过滤，800 rpm离心5分钟弃上清，保留底层细胞沉淀。
二、细胞培养
1、接种：用完全培养基重悬细胞，接种于培养瓶（T25瓶加5-6ml，10cm皿加12-15ml），置于5% CO₂、37℃培养箱中。
2、换液：48小时后首次换液，后续每2-3天更换一次培养基。
3、观察：显微镜下监测细胞密度，达80%汇合时需传代。
三、细胞传代
1、条件检查：通常在细胞达到80%-90%融合度时进行传代。
2、操作步骤：
吸出旧培养基，加入PBS清洗细胞1-2次。
加入胰酶（如胰蛋白酶）消化细胞，直至细胞从瓶壁脱落。
加入培养基终止消化，轻轻吹打使细胞分散。
1000rpm/min离心5分钟，弃上清液，用培养基重悬细胞。
根据实验需要，按适宜密度接种到新的培养瓶中。
3、传代频率：3D4/21细胞建议每周传代2-3次，传代比例1:3至1:5。IPEC-J2细胞增速较慢，建议在密度80%时传代，传代比例1:2至1:4。
四、细胞冻存
1、准备：选择对数增生期的细胞，清洗、消化并离心收集细胞。
2、冻存液：通常加入DMSO作为冷冻保护剂。
3、操作步骤：
以适宜密度加入无血清冻存液重悬细胞。
分装至冻存管，每管1.5mL。
封口膜封好，标记，先置于4℃20分钟，再移至-20℃30分钟，最后放入-80℃冰箱过夜，最终存入液氮罐。
五、关键注意事项
1、细胞选择：PCV2 培养需使用克隆筛选后的 PK15 细胞，以提高敏感性。
2、培养基优化：ST 细胞悬浮培养可采用 DMEM 与 OptiMEM 混合培养基，并添加浒苔提取物和染料木素提升病毒产量。
3、质量控制：每批次细胞需检测支原体、细菌等污染物，确保培养体系无菌。
通过遵循这些步骤，可以有效地进行猪细胞系的培养，确保实验的成功和细胞的健康生长。
