细胞培养过程中,贴壁细胞的换液是一项常规操作,但操作不当可能导致细胞脱落或损伤,影响实验结果。为了保护细胞贴壁结构,需要在操作中注意温和、精准,并根据细胞状态选择是否清洗。以下是关于细胞在换液时的一些注意事项和操作技巧:
优化细胞传代操作
传代时细胞密度不宜过高,一般建议在细胞汇合度达到80%左右时进行传代操作。消化时间应根据细胞状态调整,避免消化过度或不足,这些都会影响细胞的贴壁能力。
一、操作轻柔,减少机械损伤
换液时应沿培养瓶壁缓慢加入新鲜培养基,避免直接对准细胞滴加,以减少对细胞的物理冲击。使用移液器吸除旧培养基时,动作要轻柔,避免过度吹打或产生气泡,这些操作都可能导致细胞从瓶壁脱落。
二、控制换液频率
根据细胞的生长速度和类型调整换液频率。对于生长迅速的细胞,可能需要更频繁的换液;而对于生长缓慢的细胞,则可以适当延长间隔。常规建议的换液时间间隔为2至3天。

三、注意培养基和血清的稳定性
频繁更换培养基品牌或血清批次可能导致细胞不适应,影响其贴壁能力。因此,应尽量保持培养基和血清的稳定性,避免随意更换。如果必须更换,建议与原培养基比例混合后使用,让细胞有一个适应期。
四、使用包被剂增强贴壁
对于容易脱落的细胞,可以使用多聚赖氨酸等包被剂处理培养器皿,以增加细胞贴壁的牢固度,降低细胞聚集成团或脱落的几率。
五、保持培养环境稳定
稳定的培养环境(如温度、CO₂浓度)对维持细胞贴壁结构至关重要。频繁的环境变化或操作不当(如频繁换液、清洗)可能导致细胞状态变差,影响其贴壁能力。
通过以上措施,可以最大程度地保护细胞的贴壁结构,确保细胞在换液后能够健康生长。