细胞换液是指在细胞培养过程中，定期或在特定情况下更换细胞培养基的过程。在细胞换液过程中，避免污染是确保实验成功和细胞健康的关键。以下结合无菌操作规范、环境管理和操作技巧，为您总结避免污染的核心要点：

一、无菌操作环境准备

1、超净台使用‌

提前30分钟开启紫外灯消杀，风机启动后等待5分钟使气流稳定，形成有效空气屏障。

操作时手臂沿工作台边缘平移，避免在无菌区大幅度动作，减少气流扰动引入杂菌。

定期检查滤网，风速减弱时及时更换，确保防护效果。

2、个人防护

穿戴长袖实验服、高领口罩和无粉手套，袖口扎入手套内，避免皮肤暴露。

操作不同细胞株时需更换手套或酒精消毒，防止交叉污染。

二、换液操作规范与技巧

1、‌移液操作

使用移液枪时避免枪头接触容器口或壁，若接触则必须更换枪头。

更换枪头时从枪盒外侧向内侧取用，防止手部污染。

吸液前检查试剂状态，若液体浑浊或有杂质需立即停用。

2、‌换液步骤

开盖时瓶口斜向下，避免手部从瓶口上方经过，减少微生物落入风险。

沿培养瓶壁缓慢加入新鲜培养基，避免直接冲击细胞层。

换液频率根据细胞类型调整：原代细胞每2天一次，iPSC/ESC需每日换液，单细胞克隆每3-4天一次。

三、环境与耗材管理

1、‌细胞房维护

每半个月用7.5%过氧乙酸蒸汽全面杀菌，结合紫外消杀。

限制人员频繁进出，减少外界污染源。

2、‌耗材与试剂

枪头、离心管等耗材需高温灭菌，避免重复使用原液试剂。

培养基分装时预留1/5空间，防止热胀冷缩溢出污染。

四、应急处理与预防原则

污染前兆：若发现培养液浑浊、pH值异常（如变黄）或镜下出现黑色颗粒，需立即终止操作并隔离污染细胞。

关键原则：宁可丢弃疑似污染的细胞，也不冒险继续培养；定期冻存早期细胞备份，以便污染后复苏使用。

通过严格的无菌操作、规范化的流程管理以及定期环境维护，可显著降低细胞换液中的污染风险。‌