原代细胞是从组织直接分离的初代培养物，其传代操作比永生化细胞系更敏感，稍有不慎就可能导致细胞死亡或特性改变。因此，准确判断传代是否成功对维持实验可靠性至关重要。成功的传代意味着细胞在经历消化、重悬和再接种后仍具备活力并能继续生长。
判断标准与方法
可通过以下四个维度综合评估传代是否成功：
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评估维度 |
成功表现 |
异常提示 |
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细胞形态 |
保持原有形状（如上皮型多边形、成纤维型梭形），折光性好，轮廓清晰。 |
细胞变圆、肿胀、萎缩、碎片多或形态不均一。 |
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贴壁与增殖 |
传代后2–24小时开始贴壁，24–48小时伸展并进入对数生长期，密度稳步上升。 |
长时间悬浮、不贴壁或贴壁后不伸展；细胞数量不增反降。 |
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细胞活性 |
活细胞比例 >90%，台盼蓝染色大部分细胞拒染；代谢活性（如MTT/CCK-8）正常。 |
大量细胞被染成蓝色，代谢信号弱，提示死亡或损伤。 |
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无污染 |
培养液清澈无浑浊，无异味，镜下无细菌、真菌或支原体颗粒。 |
培养液变浑、有漂浮物、pH异常变化，或生长缓慢伴随异常形态。 |
原代细胞对消化和接种密度更敏感，建议首次传代时适当提高接种密度，有助于细胞相互作用和存活。
若细胞在传代后48小时内完成贴壁、形态正常、无污染迹象，并在后续几天内稳步增殖，则可判定为传代成功。建议记录每次传代的细胞活性与初始密度，便于优化流程。对于珍贵原代细胞，尽早冻存低代次储备液以备不时之需。
