原代细胞是从生物体组织直接分离获得的细胞，保留了体内原始的形态和功能特征。然而，在体外培养过程中，尤其是经过多次传代后，这些细胞会因环境压力、酶消化损伤及端粒缩短等因素，逐渐失去其特化表型，向更原始、增殖能力强但功能单一的成纤维样细胞转化。这种形态与功能的变化是细胞适应体外培养环境的结果，但也会影响实验数据的可靠性。

主要原因包括：‌

1、‌机械与环境压力‌：消化、吹打等操作会造成物理损伤，同时营养、环境（如pH、CO₂）的突然变化也会带来应激。

2、‌细胞异质性‌：传代后，适应性强、增殖快的亚群会逐渐占据优势，导致细胞群体特性改变。

3、‌遗传物质改变‌：传代会激发细胞进入分裂周期，随着分裂次数增加，端粒缩短，可能导致基因组不稳定和基因表达变化，进而影响形态。

‌如何判断传代是否成功？‌

成功传代后，细胞会经历一个短暂的适应期（潜伏期），随后进入‌指数生长期‌，此时细胞形态饱满、折光性强、分裂活跃，是进行实验的最佳时期。如果细胞传代后能重新贴壁并持续增殖，说明传代成功。

‌如何尽量保持原有形态？‌

1、‌优化操作‌：使用温和的消化液（如TrypLE™ Express），严格控制消化时间，轻柔吹打。

2、‌控制参数‌：保持适宜的接种密度（如软骨细胞建议2~10×10^4/cm²），避免传代次数过多。

3、‌稳定环境‌：使用新鲜培养基，保持培养箱内温度、湿度和CO₂浓度恒定。

4、‌及时冻存‌：在细胞状态良好的早期进行冻存，以备后续使用。

结论

原代细胞传代后的形态变化是普遍且规律性的生物学现象，主要表现为：

l 形态由多样转为均一（以梭形为主）

l 结构由复杂转为简化

l 功能由特异转为退化（如合成特定胶原能力下降）

因此，建议关键实验使用低代次（如2–3代）细胞，避免因反分化导致数据偏差。若需长期使用，应定期进行STR鉴定和功能验证，确保细胞身份稳定。