支原体是一种缺乏细胞壁、体积微小（180–350 nm）的原核微生物，可在无生命培养基上生长。由于其难以通过常规光学显微镜观察，且不引起培养基明显浑浊，污染常在长期共存中被忽视。据报告，细胞培养中支原体污染率高达63%–87%，是生物医学研究中的普遍难题。

主要影响维度

支原体主要通过附着于细胞表面或侵入细胞内部，竞争营养、改变代谢环境、干扰信号通路等方式影响宿主细胞。

1、生长与增殖抑制

多数受污染细胞表现出生长速度减缓，甚至停止增殖；部分肿瘤细胞系虽仍快速分裂，但其生理状态已异常。

支原体可抑制细胞增殖达50%，严重时导致细胞无法传代。

长期污染会使细胞复苏后存活率降低。

2、形态学改变

受感染细胞可能出现变圆、颗粒增多、碎片化等现象。

贴壁细胞易从培养瓶壁脱落，形成“流沙样”崩解。

某些情况下可见线粒体膨胀、细胞核空泡化、微管解聚等超微结构损伤。

3、代谢与功能紊乱

支原体大量消耗培养基中的关键成分，如精氨酸、谷氨酸、核苷前体，导致蛋白质、DNA、RNA合成障碍。

发酵型支原体降解糖类产酸，使培养液pH迅速下降（几小时内变黄），影响细胞功能。

细胞内ATP水平下降，氨基酸谱改变，酶活性异常。

4、遗传与基因表达异常

引起染色体断裂、数目异常、双着丝点染色体等染色体畸变。

产生核酸酶降解宿主DNA/RNA，导致DNA片段化，出现类似凋亡的特征。

可造成数百个基因表达水平的改变，涉及受体、离子通道、生长因子及癌基因等。

5、实验干扰与数据失真

干扰杂交瘤融合效率，降低单克隆抗体分泌能力。

影响病毒增殖与感染率，干扰膜片钳等电生理实验。

改变细胞膜抗原性，激活TLR2通路，诱导非特异性免疫反应。

使用污染细胞进行实验可能导致错误结论、重复性差、论文被质疑。

注：尽管某些细胞在污染后外观“正常”，生长速率未显著下降，但这并不表示未受影响——其分子层面的功能已广泛受损，因此必须依赖专门检测手段确认

建议

为确保实验准确性，应严格执行以下措施：

定期使用PCR、荧光染色或试剂盒对细胞进行支原体检测（建议每1–2个月一次）。

对新引入的细胞株和血清等耗材进行来料筛查。

一旦发现污染，珍贵细胞可尝试使用具有杀灭作用的清除剂（如ZellShield®）处理，普通细胞建议立即丢弃以防止扩散。

加强实验室环境控制，采用汽化过氧化氢等方法对细胞房进行周期性消毒。