伤口愈合试验，也通常称为“划痕试验”，是一种广泛建立的研究体外集体细胞迁移的技术。细胞划痕（Wound Healing)是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。其实验原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。

   条件好的实验室可以使用活细胞成像来分析创伤愈合实验中角质形成细胞或者成纤维细胞的迁移活动。结合包含的软件分析算法，有可能延迟量化间隙表面关闭和关闭推移时间的速度。使用延时显微镜获取数据的优点是，可以在恒温箱内确定和稳定的条件下记录伤口分析。

  通常，用于伤口愈合试验的细胞类型旨在重建表皮的再生特征。永生化的细胞系和原代细胞经常被用作这方面的模型。最常用的细胞类型是角质形成细胞和成纤维细胞。

基本原理：在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕/伤口”，划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕/伤口”愈合，于细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像，通过测量不同时间点的划痕间距并计算差值，可对细胞的迁移能力做出判断。

实验前准备：

1.学习：了解实验的目的、实验所用试剂耗材、实验基本操作和注意事项、结果分析等。

2.耗材：六孔板、马克笔、直尺、200ul枪头、PBS、完全培养基等。

3.规划：根据所用细胞生长速度和所需定点拍照时间提前规划实验。建议在做实验之前进行一次预实验。

实验步骤：

1.划线：于六孔板底面，马克笔顺直尺画三条横线作为标记线。

2.种板：根据分组种板，细胞密度为5x105个/孔左右。并务必铺匀。

3.划痕：待细胞长满后，用直尺比着，200ul枪头垂直于孔板和画的标记线划两条垂线，使划痕与标记线相交，可以形成若干交叉点，作为固定的检测点。

4.清洗：弃去旧培养基，用PBS轻轻润洗两到三次，直到划下来的细胞冲洗干净。

5.加液：根据分组分别加入加药培养基或无血清培养基。

6.拍照观察：划痕、清洗、加液完成后，用显微镜拍不同倍数的照片，作为0h对照。放入37℃，5%CO2培养箱中培养。在所需时间点取出细胞，于显微镜下观察同一位置划痕宽度并拍照。

7.数据分析：一种是统计细胞迁移的距离，一种是统计划痕面积。都可以用ImageJ软件来进行分析。

制作划痕实验需要注意事项：

1. 细胞的密度；划痕实验一般是几种细胞的结合，但是每种细胞的生长速度会不一样，所以需要按照细胞的生长特性调整培养时间，细胞铺满孔底时划痕的效果会比较好，建议是100%的铺满。

2. 用枪头画线时尽量垂直，以6孔板为例 ，一个孔可以画6条线

3. 画线之后一定要用PBS洗两次，以去除划下的细胞

4. 注意培养方式一定要改成无血清或者低血清的培养基，因为：划痕后用无血清培养基培养细胞，意在说明在监测的 24 小时内，划痕的缩小是细胞 迁移作用的结果，所以要将细胞增殖造成细胞迁移的影响降到蕞低；但若细胞改成无血清培养后大面积漂浮，需要适量加入血清浓度不能高于2%。

5. 放入37℃ 5% CO2培养箱，培养。可按0，10，12，15时间点取样，拍照(具体时间依实验需要而定)。

6. 统计方法：使用Image J软件打开图片后，抓取自己画的线条，计算细胞间距离的平均值。