细胞稳转标记服务是一种在细胞系中稳定表达荧光蛋白标记物的技术,用于研究细胞生物学、基因表达调控、信号传导机制等。这种技术通过将荧光蛋白基因(如luciferase、GFP、RFP)与目标基因共同表达,使得荧光蛋白作为报告基因,与目标基因表达共定位。具体来说:
1.GFP (Green Fluorescent Protein): 绿色荧光蛋白,最早在水母中发现,可通过紫外或蓝光激发发出绿色荧光。广泛用于标记细胞器、观察细胞结构和动态变化。GFP因其高稳定性和低毒性,成为细胞生物学研究中的常用工具。
2.RFP (Red Fluorescent Protein): 红色荧光蛋白,具有较长的激发和发射波长,适用于深层组织成像,减少光散射和自发荧光干扰。RFP同样用于细胞标记和追踪,特别是在多色成像实验中,与GFP结合使用以区分不同的细胞或分子。
4.luciferase (荧光素酶): 荧光素酶是一种酶,能催化荧光素的氧化反应,产生光信号。常用于活细胞成像和生物发光检测,适用于高通量筛选、细胞周期分析、细胞凋亡研究等。luciferase标记可实现非侵入性、实时监测细胞内事件。
细胞稳转标记服务通常涉及基因工程和细胞培养技术,包括但不限于:
1.质粒构建:设计并构建包含荧光蛋白基因和目标基因的表达载体。
2.转染:将表达载体导入目标细胞,实现基因的瞬时或稳定表达。
3.筛选与克隆:通过抗生素抗性、荧光筛选等方法,从转染细胞中分离出稳定表达荧光蛋白的细胞克隆。
4.表达验证:使用荧光显微镜、流式细胞仪等工具,检测荧光蛋白的表达水平和分布情况。
这项服务在基础科研和应用研究中具有重要价值,帮助科学家们更直观、准确地理解细胞功能和疾病机制。