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  • 细胞划痕实验详细说明
    2025-01-16

    伤口愈合试验,也通常称为“划痕试验”是一种广泛建立的研究体外集体细胞迁移的技术。细胞划痕(Wound Healing)是一种操作简单,经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。其实验原理是,当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。

  • 细胞培养基常用的添加成份及注意事项
    2024-11-13

          细胞培养基是细胞培养的基础,它为动物细胞的健康快速成长提供营养物质。所以只要用到细胞来制造生物技术产品,细胞培养基的重要作用就无可替代。

           细胞培养基的主要成份是水、氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助营养物质。传统的合成细胞培养基会添加一定量的血清,低血清细胞培养基或是无血清细胞培养基则在合成细胞培养基的基础上,通过调整营养成份配比或含量,或者添加一些血清替代因子。

           细胞培养基含有充分的营养物质,满足完成新细胞合成、细胞代谢等生化反应所需要的物质和能量。另外为合适的细胞培养基 pH 、缓冲能力、渗透压 、粘滞性及表面张力也是细胞正常生长发育的关键。

    细胞培养基常用的添加成份及使用注意事项:

    1、酚红在细胞培养基中用作pH值的指示剂。一般情况下,可以通过酚红的指示作用判断培养基的pH值,但低血清或是无血清细胞培养基中酚红的含量与普通细胞培养基中的酚红含量不同,不能通过肉眼观察或通过经验来判定pH值,建议使用pH计进行测定。酚红通常对含血清的细胞培养基生产的生物制品质量并不会产生明显影响,也可通过纯化技术去除,但酚红在无血清细胞培养基中可能带来胞内钠/钾失衡,影响细胞生长。

    2、碳酸氢钠在细胞培养基中主要是作为缓冲系统,此外还具有调节渗透压的作用。通常产品使用说明中的碳酸氢钠推荐量是一个标准、安全量,是在科学的基础上根据实践经验所得。但是由于不同的细胞系(株)不同,同一株细胞适应环境也可能不同(细胞耐受性不同等),且存在的地域性水质差异等,在实际生产过程中也可稍作改动,但使用者需做相应的检测(理化及细胞生产试验等)。

    3、HEPES是一种非离子缓冲液,在pH 7.2 ~7.4范围内具有较好的缓冲能力,在高浓度时对一些细胞可能有毒。HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠(0.34g /L)共用,以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。其安全浓度范围是10~25mmol/L。

    4、丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源,尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源,但是在没有葡萄糖的条件下,细胞也可以代谢丙酮酸钠。

    5、谷氨酰胺在溶液中很不稳定,4 ℃下放置1周可分解50 %,使用中最好单独配制,置-20 ℃冰箱中保存,使用前加入细胞培养液中。