细胞培养中的支原体污染因其隐蔽性和广泛影响成为实验室常见难题。

超净工作台（Clean Bench）是细胞培养实验室中提供局部无菌环境的核心设备，通过高效空气过滤器（HEPA）去除空气中≥0.3μm的颗粒物和微生物，形成垂直或水平层流洁净气流，防止样品被污染。然而，若使用不当，仍可能导致霉菌、细菌或支原体污染，造成细胞死亡和实验失败。因此，掌握正确的使用技巧至关重要。

原代细胞是从生物体直接分离的细胞，保留了体内细胞的正常生理特性，包括有限的分裂能力与自然老化程序。而细胞系是经过突变或转化、能无限增殖的细胞群体。正因如此，原代细胞在体外培养中更容易表现出老化现象。

细胞凋亡（Apoptosis）是一种程序性、受控的细胞死亡方式，与因损伤导致的坏死不同，它不会引发强烈的炎症反应。这一过程在胚胎发育、组织更新和免疫调控中至关重要。免疫系统不仅参与诱导某些细胞凋亡（如清除被感染的细胞），同时也负责及时清除体内自然发生的凋亡细胞。

细胞培养基是体外维持细胞生长与增殖的基础，需模拟体内环境，提供必要的营养物质（如氨基酸、维生素、糖类）、维持适宜的pH值（通常7.2–7.4）和渗透压（人细胞约290 mOsm/kg）。错误的选择可能导致细胞生长不良甚至死亡。

在体外细胞培养中，大多数来自实体组织的细胞属于贴壁依赖性细胞，它们必须附着于培养表面才能正常生长和增殖。细胞能否成功贴壁，取决于细胞自身的生物学特性（如表达的黏附分子）以及培养表面的物理化学性质（如电荷密度、光滑度）和是否含有促贴壁物质（如细胞外基质蛋白）。

细胞培养中的微生物污染（如细菌、真菌、支原体）会严重影响实验结果的可靠性，导致数据无效或产品报废。传统的检测方法往往耗时较长，无法满足现代生物制药和细胞治疗对高效、实时监控的需求。

在细胞培养实验中，污染是指外来微生物（如细菌、真菌、支原体、病毒）或异种细胞（交叉污染）侵入培养体系。这些污染物会与目标细胞竞争资源、改变微环境或直接干扰细胞生理功能，从而引入不可控变量，使实验结果失真。

枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种广泛应用的益生菌，能产生多种具有重要应用价值的代谢产物。这些产物在农业、医药和工业领域发挥着关键作用，如生物防治、植物促生长和病原体抑制等。

在细胞培养过程中，一旦发生微生物污染（如细菌、真菌、支原体、噬菌体等），不仅会导致细胞死亡或状态异常，还可能污染整个实验室环境。因此，对已被污染且无抢救价值的细胞，必须进行彻底灭活处理，防止交叉污染扩散。