1、无菌操作‌：全程在超净台内操作，所有接触培养基的器具需提前高压灭菌，避免细菌、真菌、支原体污染，一旦发现培养基浑浊立即弃用。
‌2、储存规范‌：未开封的培养基需‌2~8℃避光保存‌，长期存放可分装后-20℃冻存，严禁反复冻融，避免营养成分失活。
‌3、pH管控‌：使用前确认培养基pH在7.2~7.4区间，避免长时间暴露在空气中导致CO₂流失、pH偏高，影响细胞活性。
‌4、使用时效‌：严格在保质期内使用，开封后建议1个月内用完，剩余培养基需密封冷藏，避免长时间放置于室温环境。

一、细胞复苏操作
1、提前将完全培养基预热至‌37℃‌，从液氮罐取出冻存管后立即投入37℃水浴，1~2分钟内快速摇晃完成解冻。
2、用75%酒精擦拭冻存管外壁后移入超净台，将细胞悬液转移至含5~10mL预热完全培养基的离心管中。
3、1000RPM室温离心5~10分钟，吸弃上清液，加入新鲜完全培养基重悬细胞沉淀。
4/将细胞悬液转移至培养瓶，放入‌37℃、5% CO₂‌培养箱静置培养，次日观察贴壁情况并换液去除DMSO残留。
二、培养基更换操作
1、超净台内倾斜培养瓶，用移液枪缓慢吸弃全部旧培养基，注意不要触碰吸到贴壁细胞。
2、加入适量37℃预热的PBS，轻轻摇晃润洗瓶底，吸弃PBS（首次换液可重复该步骤）。
3、加入对应培养器皿推荐体积的新鲜预热完全培养基，放回培养箱继续培养，常规每2~3天换液一次。
三、细胞传代操作
1、待细胞汇合度达到‌80%~90%‌时，吸弃旧培养基，用PBS润洗瓶底2次，去除残留血清。
2、加入刚好覆盖瓶底的消化酶（如胰酶），37℃孵育1~3分钟，镜下观察细胞变圆开始脱离瓶底。
3、加入3~5倍体积的含血清完全培养基，终止消化反应，轻柔吹打瓶底制成单细胞悬液。
4、1000RPM离心5分钟，弃上清后重悬细胞，按所需比例分装至新培养瓶，补加新鲜完全培养基后继续培养。
四、细胞冻存操作
1、选取对数生长期的细胞，按传代步骤完成消化、离心，弃去上清液。
2、用预配好的冻存液（含5~10% DMSO）重悬细胞，调整细胞密度至1~2×10⁶个/mL，分装至冻存管并做好标记。
3、采用梯度降温：4℃放置30分钟 → -20℃放置1小时 → -80℃过夜，次日转移至液氮罐中长期保存。