测定意义：
磷的存在形态包括无机磷与有机磷。无机磷主要指磷酸根，参与生物体内多种代谢，包括能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和脱磷酸化等。通过测定总磷与无机磷含量即可了解作物对磷的利用率，进而为合理施肥提供依据。
测定原理：
总磷经消化后，转化成无机磷。钼蓝法是测定无机磷含量的经典方法，一定条件下，钼蓝与磷酸根生成 660nm 有特征吸收峰的物质，通过测定 660nm 光吸收， 即可计算无机磷含量，进而可计算出组织中总磷含量。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、离心机、水浴锅、可调式移液枪、1ml 玻璃比色皿、蒸馏水和浓硫酸。

1.  分光光度计预热 30 min ，调节波长到 660 nm ，蒸馏水调零。
2.  打开水浴锅，调节温度到40℃。
3.  空白管：取 EP 管，依次加入 500μL 蒸馏水，500μL 试剂三，混匀后置于 40℃水浴保温10min ，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，记为 A 空白管。
4.  标准管：取 EP 管，依次加入 50μL 标准液，450μL 蒸馏水，500μL 试剂三，混匀后置于40℃水浴保温 10min ，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，记为 A 标准管。
5.  测定管：取 EP 管，依次加入 50μL 上清液，450μL 蒸馏水，500μL 试剂三，混匀后置于40℃水浴保温 10min ，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，记为 A 测定管。

试剂一：液体×1 瓶，4℃保存（强腐蚀性，强氧化性）。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前配制，加入 15 mL 蒸馏水，溶解后再加入 10 mL试剂二，混匀。
标准品：液体×1 支，－20℃保存。

按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1 ：5~ 10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL
试剂一）进行冰浴匀浆。10000rpm ，4℃离心 10min ，取上清，置冰上待测。
测定：
1.  分光光度计/酶标仪预热 30 min ，调节波长到 660 nm ，蒸馏水调零。
2.打开水浴锅，调节温度到40℃。
3.  空白管：取 0.5mL EP 管，依次加入 100μL 蒸馏水，100μL 试剂三，混匀后置于 40℃水
浴保温 10min ，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，记为 A 空白管。
4.  标准管：取 0.5mL EP 管，依次加入 10μL 标准液，90μL 蒸馏水，100μL 试剂三，混匀后
置于 40℃水浴保温 10min ，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，记为 A 标准管。
5.  测定管：取 0.5mL EP 管，依次加入 10μL 上清液，90μL 蒸馏水，100μL 试剂三，混匀后
置于 40℃水浴保温 10min ，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，记为 A 测定管。
注意：空白管和标准管只需测定一次。
组织无机磷含量计算：
（1）  按照蛋白含量计算
无机磷含量(μmol/mg prot)= [C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V 总÷Cpr=1×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)÷Cpr
（2）  按照样本质量计算
无机磷含量(μmol/g  鲜重 )= [C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V 总÷W=1×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)÷WC 标准液：1mmol/L；V 总：上清液总体积，1mL=0.001 L；W：样品质量，g。

1.    试剂三需临用前配制，并且当天使用完毕。
2.    40min 内完成比色。
3.    最低检出限为 10 μmol/L。